做紫外的时候没有问题,拿DMSO做参比就是了。做HPLC的时候有点问题就是,DMSO与流动相的相溶性问题,相容性不好,出的峰肯定很丑。
选用反相柱,可用流动相为甲醇/乙腈-水/醋酸缓冲液。建议看看有关高效液相测定黄酮类 和 酚类物质时所采用的流动相的文献。
可以。不过有三个问题,一,看它的出峰怎么样,有些物质的峰形不好,需要调整,所以要加入缓冲盐、扫尾剂等等,如果峰型好,那么方法就OK。二,保留时间怎么样。一般反相色谱,3min以前都是死体积,最好主物质在5min出峰。如果太快出峰,那就是物质在色谱柱当中没有停留。
可能是之前用的缓冲盐没有冲洗干净,现在盐析出了导致柱子堵了。可以用5%的甲醇水溶液低流速冲洗几天问题就可以解决。实在不行的话就反冲吧。
这个有多方面考虑因素,首先是管路问题,先断开色谱柱,如果发现压力还是大,那就是管路里有盐或者微生物堵塞,需要用强溶剂清洗,甲醇可以试试看。
柱压高是因为流动性相或是样品过滤不好,柱子被堵压力就高了,C18柱可以用乙腈和超纯水配的流动相清洗,流速由低到高慢慢洗,有可能可以清洗得好。还有可能是柱子用久了,寿命快到了。
如果你必须用甲醇做流动动相的话,建议通过提高柱温,和加大有机相比例,及力降流速的办法,把压力降下来。
1、流速1ml/min,压力应该在10mpa左右。
2、你所提供的色谱柱,一般情况下,以甲醇为流动相,流速为1ml/min时,柱压在700-900psi,压差在50psi以下均为正常。10%乙腈我没用过,30%乙腈的一般在1500psi左右,10%乙腈应该比它低。纯水可能损坏色谱柱,纯乙腈可能堵塞单向阀,不建议使用上述流动相。
3、一般来说,流速0ml/min条件下,纯乙腈的话压力很低,大约也就2-3MPa;纯甲醇大概5-6MPa;10%甲醇水就大了,8-14MPa都有可能。主要是看你的有机相和水相比例。
4、正常压力不是固定的,一般来说,流速0ml/min条件下,纯乙腈的话压力很低,正常压力为2-3MPa。
5、可能是之前用的缓冲盐没有冲洗干净,现在盐析出了导致柱子堵了。可以用5%的甲醇水溶液低流速冲洗几天问题就可以解决。实在不行的话就反冲吧。
6、C18柱子不能用纯水冲洗,再说本来就堵了,压力很高应该选择压力低的溶剂。如果你确定是堵塞了,就用纯乙腈反冲,先用低一点的流速,比如01ml/min,看压力情况,不要超过200bar,再慢慢提高流速,但不要超过的流速,如果是真的堵了,可能会压力慢慢降下来的。
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