C18液相用色谱柱如何活化（新c18液相色谱柱活化的作用）

本文目录一览：

• 1、液相色谱柱应该如何活化?
• 2、新色谱活化用纯试剂吗
• 3、液相色谱柱应该如何使用和维护?
• 4、液相色谱柱的保养方法?
• 5、液相色谱柱再生
• 6、高效液相色谱柱第一次使用时应如何清洗

液相色谱柱应该如何活化?

1、因此，在首次使用时，没有必要用水进行冲洗，只要用流动相彻底地平衡色谱柱即可。如果使用流动相添加剂（如缓冲液或离子对试剂），建议使用含原有比例但不含这些添加剂的流动相进行中间过渡。使用10至20个色谱柱体积进行冲洗将有助于过渡到流动相。

2、酸性活化：将柱子用酸性溶液进行洗涤，如使用 0.1 M 的盐酸、甲酸或乙酸等溶液。这可以去除柱子上的碱性杂质，并帮助恢复其亲水性。碱性活化：将柱子用碱性溶液进行洗涤，如使用 0.1 M 的氢氧化钠或氢氧化钾等溶液。这可以去除柱子上的酸性杂质，并帮助恢复其疏水性。

3、首先用50倍柱体积的异丙醇清洗，因异丙醇粘度较大需适当放低流速；之后，用50倍的甲醇清洗；之 后，用异丙醇过渡回到平常使用的正相流动相，即可。（2）平时在反相条件下使用：缓冲盐应及时冲洗，不能直接用纯甲醇冲洗缓冲盐等，属常识就不作特别交待。

4、再生处理包括活化（右→左）和净化（左→右）两种。硅胶、氧化铝、极性键合相色谱柱按下列顺序冲洗：三甲基戊烷或己烷←→三氯乙烷←→乙酸乙脂←→丙酮←→乙醇←→水。键合相硅胶柱：蒸馏水←→甲醇（冲洗过程中可加入少量二甲基甲酰胺）。

5、新买的液相色谱柱需要活化，活化的方法因柱子而异，普通反相C18柱的话我是这样活化的：0.5ml/min流速的甲醇冲洗2小时以上。液相的新色谱柱都是保存在一定的保存液中的，所谓的活化就是替换掉其中的保存液，冲洗掉柱中可能残留的其他杂质，以免影响后续分析工作。

新色谱活化用纯试剂吗

用。色谱柱是高效液相色谱仪最主要的部件，被测物质能否被很好的分离和测定，色谱柱的性能起着决定性的作用。新的色谱柱活化：采用100%甲醇1ml/min冲洗60min，再换成流动相进行平衡。色谱又称色层法或层析法，是一种物理化学分析方法。

因此，在首次使用时，没有必要用水进行冲洗，只要用流动相彻底地平衡色谱柱即可。如果使用流动相添加剂（如缓冲液或离子对试剂），建议使用含原有比例但不含这些添加剂的流动相进行中间过渡。使用10至20个色谱柱体积进行冲洗将有助于过渡到流动相。

连接色谱柱：将色谱柱连接到色谱系统，并确保活化溶液可以通过柱。通过色谱柱：将活化溶液缓慢地通过色谱柱，可以使用泵或手动推进，以确保溶液充分覆盖柱内表面。静置和冲洗：让活化溶液在色谱柱内静置一段时间（通常为15-30分钟），使其与柱内表面发生反应。

色谱柱活化的一般步骤：安装以乙腈（反相）或乙腈正己烷（1：99）正相冲洗整个系统。检查流路系统有无气泡，气泡会造成色谱柱填料间隙而影响色谱柱的分离效能。

液相色谱柱应该如何使用和维护?

1、在条件允许的情况下，最好采用与色谱柱同种填料的固相萃取柱过滤进样溶液，可以减少在色谱柱上死吸附的物质或易堵塞的大分子样品。如生物样品中的小极性的油脂类易于沉淀死吸附在C18反相色谱柱中，导致柱效降低、柱压升高。

2、色谱柱是液相色谱仪的核心部分，由空柱和填料组成。在使用前，需将空柱洗净并填充固定相。为防止柱污染，通常会使用一个预柱来保护主柱。反相键合相柱需要特别注意再生过程，必须先用流动相冲洗，然后用甲醇进行清洗和再生。 流动相的洗脱方式 流动相的洗脱方式包括恒溶剂脱洗法和梯度洗脱法。

3、、液相色谱柱不使用或储存时，应封闭并储存在惰性溶剂中。

液相色谱柱的保养方法?

1、若您的液相色谱柱使用过程中加入了磷酸作为流动相成分，维护柱子的长期使用寿命是至关重要的。 对于反相色谱柱，首先使用10%的甲醇溶液以0毫升/分钟的流速冲洗柱子一小时，帮助去除残留的磷酸。

2、仪器设备的维护和保养 1 色谱柱日常维护 1 长期不使用HPLC应该将色谱柱从系统拆除拆除前应该充分平衡色谱柱一般为用甲醇或乙腈冲洗色谱柱40分钟以上。

3、HILIC 是亲水柱 一般用 90%的乙腈-水保存就可以了。最好按照说明书上的方法保存。

液相色谱柱再生

离子交换树脂柱：高浓度的NaCl溶液（1-2molL的NaCl溶液）可使大部分树脂再生，油脂等少数与树脂紧密结合的物质可用低浓度碱溶液（如0.1molL的NaOH溶液）冲洗，酸性有机物吸附在固定相的用低pH缓冲液冲洗，碱性有机物用高pH缓冲液冲洗，然后再用蒸馏水←→甲醇←→二氯甲烷←→甲醇←→蒸馏水冲洗。

色谱柱的再生指的就是柱效下降的色谱柱通过一定的方法使柱效恢复，一般液相色谱柱里用的较多。

以我们常用的硅胶基质色谱柱为例，简要阐述常用色谱柱的清洗与再生。 1，色谱柱的清洗与再生 色谱柱的使用前后都需经较强的流动相冲洗。

先用95%乙腈+5%水冲洗旧柱子（冲去柱子中残留的缓冲盐和之前难以洗脱的组分），关掉流速，待流速降至0后，把柱子两边的PEAK头拧下来，用配套的塞子将换下的柱子两头堵上，密封保存更换新的色谱柱时，应先将需换上的柱子两边的塞子旋开。

离子交换或HILIC模式下的使用，其前后的处理步骤与反相类似。遇到问题时，可以参考以上清洗和再生步骤，必要时进行针对性处理。总结来说，液相色谱柱氨基柱的使用并非神秘难懂，关键在于理解其兼容性、正确的清洗与保存方法。只要遵循这些指南，您就能在实验中得心应手。

高效液相色谱柱第一次使用时应如何清洗

用水/有机相（10/90～5/95），以0.3-0.6ml/min流速冲洗2h以上，再用100%有机溶剂，以0.3-0.6 ml/min流速冲洗1h以上，最后用100%有机溶剂，以0 ml/min流速冲洗1h以上。

新购买的“高效液相色谱柱”一般 需要做一下3点：1：用甲醇冲洗柱子30分钟到1个小时；2：在1的步骤下，使用甲醇：水=1：9 作为流动相冲洗柱子30分钟以上；3：完成上面2步才能用流动相冲洗柱子30分钟以上。再进样。上面得甲醇为色谱级，水一般选择超纯水、二次蒸馏水。

如果选择性仍和以前不一样，则表明还有其他杂质留在柱子里，这时应考虑更加严格的清洗：先用20倍柱体积的水，再用相同体积0.05mol/L硫酸，最后用流动相溶剂。酸洗常能洗下有机溶剂所不能洗下的剩余杂质。

色谱柱清洗要看你的色谱柱是孔径是多少微米，适合的流速是多少。以6微米的为例，先用纯水清洗2小时，再用甲醇清洗1小时。用的时候直接换上流动相。高效液相色谱柱的系统由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。